3 spôsoby, ako robiť bunkové kultúry

Bunkové kultúry sú zložitý postup, ktorý môžu vykonávať len profesionálni laboratórni pracovníci, pretože si vyžaduje veľa špeciálneho školenia a vybavenia. Tento proces zahŕňa odber malej vzorky buniek zo živočíšneho tkaniva a povzbudenie buniek k množeniu. Používanie aseptických postupov, výber ideálnej kultúry a média a udržiavanie buniek v priaznivom prostredí pomáha zabezpečiť dobré rozmnožovanie. Odborníci začínajú tým, že si pripravia pracovný priestor, potom si vyberú najlepšie materiály na bunkové kultúry pre experiment. Potom je dôležité monitorovať novokultivované bunky a podľa potreby ich subkultúrovať, aby ste mohli pokračovať v procese.

Metóda 1 z 3: Príprava pracovného priestoru


Vytvorte si aseptický pracovný priestor a sterilizujte si vybavenie. Postriekajte pracovnú plochu a vnútornú stranu digestora na bunkové kultúry dezinfekčným sprejom so 70 % alkoholom.[1]
Na sterilizáciu vybavenia v laboratóriu sa bežne používajú aj chlórnany, fenoly a alkoholy, ale overte si, čo je k dispozícii vo vašom laboratóriu.[2]

  • Odstráňte z pracovného priestoru všetky cudzie predmety, aby ste znížili neporiadok. Neskladujte predmety v rovnakom priestore, v ktorom vykonávate bunkové kultúry.
  • Uistite sa, že ste nechali zapnutý ventilátor digestora bunkovej kultúry. Nevypínajte ho, pokiaľ sa digestor nebude používať dlhší čas.
  • Ak máte otázky o tom, čo použiť na sterilizáciu pracovného priestoru, poraďte sa s vedúcim laboratória.


Umyte si ruky a nasaďte si osobné ochranné prostriedky. Na umývanie rúk používajte antibakteriálne mydlo a teplú vodu. Potom si nasaďte rukavice, plášť, ochranné okuliare, masku a všetky ostatné osobné ochranné prostriedky, ktoré si váš experiment vyžaduje.[3]

  • Ak máte dlhé vlasy, nezabudnite si ich zviazať, aby vám neprekážali.


Sterilizujte všetky činidlá, roztoky alebo iné médiá, ktoré budete používať. Môže to zahŕňať použitie autoklávu alebo sterilného filtra. Skôr ako sa pokúsite sterilizovať médium, overte si pokyny pre typ média, ktoré používate.[4]

  • Po sterilizácii média banku ihneď uzavrite, aby ste zabránili kontaminácii.


Dodržiavajte sterilné postupy manipulácie, aby ste zabránili kontaminácii. Kontaminácia bunkového média chemickými alebo biologickými látkami môže experiment zničiť. Medzi chemické kontaminanty patria detergenty, voda, endotoxíny a kontaminanty v médiách bunkových kultúr. Medzi biologické kontaminanty patria plesne, kvasinky, baktérie, vírusy a mykoplazmy. Aby sa tieto kontaminanty nedostali do média bunkovej kultúry, vždy dodržiavajte aseptickú techniku.[5]

  • Napríklad na prenos média do banky je najlepšie použiť pipetu, pretože nalievanie média zvyšuje riziko kontaminácie.

Tip: Vždy pracujte pomaly a s rozvahou, aby ste zabezpečili zachovanie sterilného pracovného priestoru.

Metóda 2 z 3:Výber buniek, kultúry a média


Vyberte vhodnú bunkovú líniu pre svoje experimenty. Môžete získať širokú škálu živočíšnych bunkových línií od komerčných alebo neziskových dodávateľov. Skontrolujte, aké typy buniek sú k dispozícii, a vyberte si tú, ktorá je pre váš experiment najvhodnejšia. Uistite sa, že ste si vybrali kvalitnú bunkovú líniu, aby ste zvýšili šance na úspešný experiment. Niektoré kritériá, ktoré môžete zvážiť, zahŕňajú: [6]

  • Druh bunky
  • Funkčné vlastnosti buniek
  • Či budete potrebovať konečné alebo súvislé bunkové línie
  • Ideálne rastové podmienky a vlastnosti
  • Či potrebujete normálne alebo transformované bunky

Varovanie: Nikdy sa nepokúšajte kultivovať bunky odobraté od niekoho, kto pracuje v laboratóriu. Náhodné zavedenie týchto buniek späť do tela človeka by mohlo mať za následok zhubné ochorenie.[7]


Pre väčšinu typov buniek použite adherentnú kultúru. Adherentná kultúra je umelý substrát, na ktorý sa navrstvujú bunky. Tento typ kultúry funguje najlepšie pre väčšinu živočíšnych buniek, pretože na rozmnožovanie potrebujú substrát, na ktorom spočívajú. Najlepšie je však skontrolovať špecifikácie bunkovej línie, ktorú používate, aby ste určili, či potrebujete tento typ kultúry.[8]

  • Po pridaní vášho média k bunkám v adherentnej kultúre sa pozrite na bunky pod mikroskopom a zistite, či sa uvoľnili zo substrátu. Budú rozložené, ak sa uvoľnili z podkladu.[9]


Vyberte suspenznú kultúru pre bunky, ktoré na ňu boli adaptované. Pri suspenzii bunky na ničom nespočívajú. Namiesto toho sa voľne vznášajú v kvapaline, čo môže uľahčiť zväčšovanie kultúry pridaním média. Niektoré bunkové línie boli špeciálne upravené na použitie v suspenzii, preto sa pre istotu informujte u výrobcu bunkovej línie. Suspenzné médium je tiež dobrou voľbou pre bunky, ktoré nie sú priľnavé.[10]

  • Majte na pamäti, že ak používate suspenznú bunkovú kultúru, budete musieť vykonávať denné počítanie buniek.


Vyberte kultivačné médium, ktoré je pre vaše bunky najvhodnejšie. Ideálne kultivačné médium sa bude líšiť v závislosti od typu buniek, ktoré používate. Informujte sa u výrobcu bunkovej línie, aby ste určili ideálne médium pre bunky, ktoré používate. Medzi bežné typy patria: [11]

  • Sérum
  • Základné médiá
  • Médiá so zníženým obsahom séra
  • Médiá bez séra

Metóda 3 z 3: Monitorovanie buniek


Skontrolujte hodnoty pH a CO2 v bunkovom médiu. Úroveň CO2 v médiu je najlepšie udržiavať v rozmedzí 4 – 10 % pre všetky bunkové línie. Ideálna úroveň pH média sa však líši podľa typu buniek, ktoré používate, preto vždy skontrolujte úroveň pH bunkovej kultúry. Podrobnosti o ideálnej úrovni pH zistite u výrobcu bunkovej línie alebo použite bežné odporúčané úrovne pH pre typy buniek, ktoré používate.[12]

  • Napríklad bunky cicavcov rastú najlepšie pri pH 7.4, ale hmyzie bunky rastú najlepšie pri pH 6.2.


Regulujte teplotu, aby ste dosiahli optimálne prostredie. Niektorým bunkám sa darí len v úzkom teplotnom rozmedzí, zatiaľ čo iným bunkám sa môže dariť v širšom rozsahu teplôt. Zvážte typ buniek, ktoré používate, a upravte teplotu prostredia, v ktorom bunky uchovávate, na ideálnu úroveň. Niektoré bežné odporúčania týkajúce sa teploty zahŕňajú: [13]

  • Ľudské bunky a bunky cicavcov – 36 až 37 °C (97 až 99 °F)
  • Hmyzie bunky – 27 °C (81 °F)
  • Vtáčie bunky – 38.5 °C (101.3 °F)
  • Studenokrvné bunky – 15 až 26 °C (59 až 79 °F)


Hneď po založení kultúry spočítajte bunky pomocou hemocytometra. Hemocytometer je mriežka podobná šošovke, ktorá prechádza cez bunky pod mikroskopom. To vám umožní ľahšie počítať políčka tak, že ich rozdelíte na štvorce a iné menšie úsečky.[14]

  • Uistite sa, že ste zaznamenali počet buniek v každej mriežke na hemocytometri, aby ste pri ďalšom počítaní mohli určiť, či sa bunky množia.

Tip: Použite kliker, ktorý vám uľahčí sledovanie počtu buniek v kultúre.


  • Subkultúrujte bunky, keď sa zdvojnásobia. Keď sa počet buniek v médiu zdvojnásobí, môžete ich subkultúrovať a pokračovať v ich raste tak, že bunky rozdelíte do dvoch nádob a do každej pridáte čerstvé médium. Použite rovnaký typ substrátu alebo suspenzného média, aký ste použili na počiatočnú bunkovú kultúru.[15]

    • Rozdeľte bunky do 2 baniek tak, aby v každej bola polovica, potom pridajte do nádoby 3 diely nového média tak, aby bolo 25 % starého a 75 % nového média.[16]
  • Odkazy