Ako používať pipetu Eppendorf: 13 krokov (s obrázkami)

Eppendorfove pipety sú bežným laboratórnym nástrojom používaným na meranie a transport kvapalín. Vzhľadom na cenu týchto užitočných nástrojov budete musieť dbať na zachovanie ich stavu. Pipety majú aj rôzne farebné špičky, ktoré predstavujú rôzne dávky.

Časť 1 z 3:Nastavenie pipety


Skontrolujte tlačidlo piestu pipety, či máte správne tlačidlo. Aj keď ste si celkom istí, že máte ten správny, venujte chvíľu kontrole tlačidla piestu. Piest by mal označovať rozsah pipety.

  • Ak má vaše laboratórium niekoľko pipiet a vy chytíte nesprávnu, môžete ju omylom nastaviť mimo jej rozsahu a trvalo ju poškodiť.
  • Pipety sa zaraďujú do nasledujúcich radov: P10 (.5 až 10 μl), P20 (2 až 20 μl), P200 (20 až 200 μl), P1000 (200 až 1000 μl), P5000 (1000 až 5000 μl).[1]


Ak je to potrebné, nasaďte si na pipetu špičku. Používanie pipety bez špičky by mohlo poškodiť jej citlivé vnútorné časti. Tipy by mali byť sterilné, ak robíte mikrobiologickú prácu. Všeobecne platí, že špičky sa nasadia na hriadeľ pipety a pevne sa zaistia.[2]

  • Ak pracujete na projekte, ktorý si vyžaduje sterilné podmienky, dávajte pozor, aby sa hrot nedotkol žiadneho kontaminovaného predmetu, napríklad rúk alebo pracovného povrchu.
  • Priehľadné špičky predstavujú rozsah 2 – 10 mikrolitrov (μl), žlté špičky 10 – 100 μl a modré špičky 100 až 1000 μl. Pri používaní pipety vždy používajte jednorazovú špičku.[3]


Identifikujte časti pipety. Hrot pipety by mal byť číry, žltý alebo modrý. Pri pohybe pipety smerom nahor sa za špičkou nachádza plastový hriadeľ. Nad hriadeľom (a po jeho boku) je rameno z nehrdzavejúcej ocele, cez ktoré prechádza tekutina. Telo pipety bude mať nasledovný tvar:

  • Piestové tlačidlo v hornej časti (oproti koncu jednorazovej špičky).
  • Tlačidlo na vysunutie špičky na základni piestového tlačidla.
  • Ovládač na nastavenie objemu pod tlačidlom vyhadzovača.
  • Mikrometer z nehrdzavejúcej ocele pod voličom na nastavenie objemu.
  • Indikátor objemu na čelnej strane pipety.[4]


Správnou manipuláciou zabráňte poškodeniu pipety. Otáčanie gombíka na nastavenie objemu mimo horného alebo dolného rozsahu pipety by ju mohlo poškodiť. Pipetu držte vo zvislej polohe vždy, keď obsahuje tekutinu. Ak ju položíte na bok, môže sa stať, že tekutina prenikne do citlivých častí pipety.

  • Nedovoľte, aby sa piest po načerpaní tekutiny do pipety alebo jej vypudení z pipety zlomil dozadu. Mohlo by to spôsobiť poškodenie piestu vo vnútri pipety.


Nastavujte pipetu, kým nedosiahnete požadovaný objem. Vaša pipeta môže mať malé čierne bezpečnostné tlačidlo, ktoré je potrebné stlačiť pri otáčaní voliča na nastavenie objemu. V opačnom prípade budete musieť gombík pred nastavením najprv vytiahnuť, ale po nastavení pipety nezabudnite gombík zatlačiť späť.

  • Ovládajte gombík na nastavenie objemu miernou silou a nikdy neotáčajte gombíkom, ak cítite odpor. Otáčanie gombíka v smere s odporom môže pipetu poškodiť.

Časť 2 z 3:Kreslenie (aspirovanie)


Stláčajte piest, kým nedosiahne prvú zarážku. Keď pocítite odpor piestu, nastavili ste ho tak, aby ste mohli čerpať množstvo nastavené gombíkom na nastavenie objemu. Jemne zatlačte piest; ak ignorujete odpor, môžete zatlačiť aj za prvú zarážku, ale neodporúča sa to.[5]


Ponorte jednorazovú špičku pipety do kvapaliny. Pipetu držte pod uhlom 90° tak, aby s povrchom kvapaliny vytvorila tvar písmena L. Ak je to možné, podržte špičku asi štvrť palca (.64 cm) od dna nádoby s kvapalinou.[6]
Hriadeľ pipety však neponárajte do kvapaliny.[7]

  • Dávajte pozor, aby ste hrot pipety nestlačili na dno nádoby s tekutinou. Mohlo by to tiež spôsobiť poškodenie pipety.[8]


Natiahnite tekutinu do pipety. Keď je špička ponorená, použite tlačidlo piestu, aby sa piest vrátil do východiskovej polohy (úplne vysunutý). Robte to pomaly, aby sa piest nevytrhol.[9]

  • Pred premiestnením pipety počkajte niekoľko sekúnd po tom, ako sa piest vráti do pôvodnej polohy. Tým sa zabezpečí, že sa odoberie celé množstvo kvapaliny.

Časť 3 z 3: Dávkovanie


Umiestnite pipetu nad prijímajúcu nádobu. Vyberte špičku pipety z kvapaliny. Umiestnite pipetu pod uhlom tak, aby sa jej špička dotýkala bočnej steny prijímajúcej nádoby a tvorila uhol 45° (v polovici medzi smerom hore a dole a plochou).


Dávkujte kvapalinu do prijímacej nádoby. Ak je v prijímajúcej nádobe už tekutina, držte pipetu tak, aby bol jej hrot tesne nad jej povrchom alebo mierne nad dnom nádoby. Jemne zatlačte piest na prvú zarážku, aby ste uvoľnili kvapalinu.[10]


Stlačte piest na Druhý doraz, aby ste odstránili kvapalinu. Kým je pipeta stále v nádobe, počkajte niekoľko sekúnd s piestom zasunutým na Prvý doraz. Teraz ste pripravení stlačiť piest na druhý doraz, aby ste odstránili všetku kvapalinu, ktorá ešte zostala v hrote.[11]


Vyberte pipetu z prijímacej nádoby. Po dosiahnutí druhej zarážky naďalej držte piest smerom nadol. Vyberte pipetu z nádoby a pomaly uvoľňujte piest, kým sa nevráti do pôvodnej (úplne vysunutej) polohy.[12]


  • Zlikvidujte špičku a vráťte pipetu na bezpečné miesto na uskladnenie. Hrot sa dá ľahko vybrať pomocou tlačidla na vysunutie hrotu. To však spôsobí, že sa špička uvoľní z pipety. Pred stlačením tlačidla vysúvania sa uistite, že špička smeruje na vhodnú nádobu, a potom pipetu odložte.[13]
  • Odkazy